近年来，在mRNA层面或蛋白层面如何调控AR剪切变异体一直是研究热点。在组织样本中，通常是根据AR-V7蛋白是否属于核定位鉴定AR-V7的状态。而AR-V7核定位无法通过检测mRNA实现。因此，对于AR-V7阳性的鉴定标准，是否需要进行核定位，值得进一步探索。

在本课题组前期研究中，已经验证了CTC AR-V7蛋白检测可以预测ARSi和紫杉烷对患者的疗效。该研究使用基于病理切片的CTC检测方法，可以评估CTC AR-V7蛋白的表达状态及其在CTC中的定位（细胞核或细胞质）。

本研究旨在通过不同的AR-V7阳性鉴定标准,即特异性核定位和非特异性核定位，对比两个标准对患者用药指导的准确性，是否通过放宽CTC AR-V7阳性的鉴定标准，使更多的患者避免接受ARSi治疗导致耐药，而从紫杉烷的治疗中获益。

本研究纳入了进展期的mCRPC患者，这些患者即将开始接受新的治疗方案（紫杉烷或ARSi）。每一个疗程后，患者的疗效通过前列腺癌特异性抗原（PSA）表达水平的变化进行评估。在治疗12w后，当患者PSA降低水平≥50%时，则被定义为敏感性患者，否则为耐药性患者。

检测样本为7mL外周血，通过免疫荧光染色对CTC及AR-V7进行鉴定，包括DAPI、CK、CD45、AR-V7。使用两种不同的AR-V7阳性鉴定标准（特异性核定位和非特异性核定位）。当AR-V7在细胞质和细胞核中属于弥漫性表达时，也被定义为非特异性核定位。特异性核定位的标准是只在细胞核内检测到AR-V7非弥散性表达。

本次研究共纳入了161例mCRPC患者,共采集到191份血样，其中128个样本来自接受ARSi治疗前的患者，63个样本来自接受紫杉烷治疗前的患者。在这些患者中，130例(80.8%)患者采用了单药治疗，30例(18.6%)患者采用了2种药物联合疗法，1例(0.6%)患者采用了3种药物联合疗法。 

对样本中CTC AR-V7进行了检测，细胞核及细胞质定位的CTC AR-V7如图1所示。无论是细胞核定位，还是细胞质定位，AR-V7的检出率都随着接受治疗方案数的增加而升高（图1）。

图1 不同的CTC AR-V7定位图.(A)CTC AR-V7细胞核定位,(B) CTC AR-V7细胞质定位, (C)表达AR-V7的细胞簇,(D)不同治疗阶段患者CTC AR-V7的阳性率.

特异性核定位AR-V7可更准确预测接受ARSi治疗的患者PSA变化

在128个接受ARSi治疗前的样本中，47例（37%）患者对ARSi治疗显示出敏感性，81例（63%）患者具有耐药性。按照特异性核定位AR-V7阳性的鉴定标准，47例敏感性患者均是AR-V7阴性；在81例耐药性患者中，有16例（20%）患者是AR-V7阳性（图2A）。而按照非特异性核定位AR-V7阳性的鉴定标准，47例敏感性患者中，有6例（13%）患者是AR-V7阳性；81例耐药性患者中，26例（32%）患者是AR-V7阳性(图2B)。而这两种AR-V7阳性鉴定标准对接受紫杉烷治疗的患者治疗结果没有特异性(图2C、D)。

图2.不同的CTC AR-V7阳性鉴定标准下患者接受治疗后PSA结果统计.(A)特异性核定位AR-V7阳性鉴定标准下患者接受ARSi的治疗结果, (B)非特异性核定位AR-V7阳性鉴定标准下患者接受ARSi的治疗结果, (C)特异性核定位AR-V7阳性鉴定标准下患者接受紫杉烷的治疗结果, (D)非特异性核定位AR-V7阳性鉴定标准下患者接受紫杉烷的治疗结果.

特异性核定位AR-V7可更准确预测接受ARSi治疗的患者生存期

对于接受ARSi治疗的患者，无论是特异性核定位（图3A），还是非特异性核定位(图3B) AR-V7阳性的鉴定标准，治疗前AR-V7阳性患者的总生存期短于阴性的患者。不过，当采用特异性核定位的AR-V7阳性鉴定标准时，两者的生存期差距更大(HR 10.4, p<0.0001 vs HR 4.3, p < 0.0001),中位生存期更短（4.6 vs 10.0 m）。而在接受紫杉烷治疗的患者中，无论哪种鉴定标准，AR-V7阳性患者的生存期略短于阴性患者（HR 3.2, p = 0.0005 vs HR 3.2, p = 0.0007）(图2C)，中位总生存期基本一致（8.9 vs 9.2 m）（图D）。

图3. 不同的CTC AR-V7阳性鉴定标准下患者接受治疗后生存期结果统计.(A)特异性核定位AR-V7阳性鉴定标准下患者接受ARSi的治疗结果, (B)非特异性核定位AR-V7阳性鉴定标准下患者接受ARSi的治疗结果, (C)特异性核定位AR-V7阳性鉴定标准下患者接受紫杉烷的治疗结果, (D)非特异性核定位AR-V7阳性鉴定标准下患者接受紫杉烷的治疗结果.

通过对比两种不同的CTC AR-V7阳性鉴定标准，发现特异性核定位AR-V7阳性鉴定标准能更准确的指导患者的用药。

参考文献：

Howard I. Schera, Ryon P. Grafc, Nicole A. Schreiber，et al. Nuclear-specific AR-V7 Protein Localization is Necessary to Guide Treatment Selection in Metastatic Castration-resistant Prostate Cancer[J]. Eur Urol. 2017 June ; 71(6): 874–882.